冬虫夏草的毕业论文

冬虫夏草分离毕业论文

1.冬虫夏草的研究与进展的提纲

冬虫夏草的研究进展（付光伟） | [<<] [>>] -------------------------------------------------------------------------------- 冬虫夏草是球壳目、麦角菌科、虫草属的虫生真菌，寄生于鳞翅目昆虫幼虫体上，把虫体变成充满菌丝的僵虫，这是菌核部分，由菌核生出有柄的棍棒形的子座。

虫草是一种子囊菌，其生活史可分为分生孢子阶段（无性型）和子囊孢子阶段（有性型）。其具益精气、补虚损、止咳化痰之功效，具有免疫调节、抗肿瘤、升白细胞、降血压、抗衰老、抗疲劳、调节内分泌、抑菌、抗病毒等多种药理作用，长期以来被视为珍贵的强壮滋补中药和藏药。

它主要产于西藏、青海、四川、云南等省3500~5000 m高原高寒草甸，因采集困难，资源奇缺，价格昂贵。全世界已报道的虫草属真菌已达400多种，我国已记载的有90多种。

1 冬虫夏草生态生物学特性 1.1 地理分布冬虫夏草主要分布在我国的青藏高原，主产在青海和西藏，以青海的产量最多，其次为西藏的北部，此外，四川西部、云南西北部、甘肃南部和尼泊尔也有少量分布。商品中把产于藏民居住区的称为“藏草”，质较优，藏语称“牙扎衮布”；把产于非藏民居住区的统称为“川草”，质较次。

青海省玉树地区的囊谦县和曲麻莱县所产之虫草个大、色黄、气浓，为全省所产虫草中之极品。 1.2 生态环境冬虫夏草多生于海拔3500~5000m的高山草甸或高山灌丛草甸的土层中。

这些地区常年平均温度低，无霜期短，夏季雨水多，土层肥厚，主要建群植物为莎草科篙草属和苔草属及蓼科蓼属植物，如珠芽蓼、圆穗蓼、拳参、尼泊尔蓼、肾叶山蓼和百合科植物川贝母等，有些地区还间有生长某些高山矮灌木，如蔷薇科的金露梅，杜鹃花科头花杜鹃等。 1.3 生物学特性冬虫夏草因冬季受菌寄生的幼虫蛰居土中，夏季自虫体头部生出似草的子座而得名。

每年6月下旬至7月上旬，蝙蝠蛾的蛹开始羽化。成虫初呈白色，1h左右后变为棕红色，后又变棕黑色，前后翅布满花斑，雌雄蛾交配后即在植株上产卵，平均每只雌蛾产卵400~500粒，最多可达700粒，成虫自羽化到死亡一般为3d。

卵在适宜的温湿度条件下，经一个月左右孵化。幼虫白色，孵出后迅速钻入土中。

以尼泊尔蓼、珠芽蓼、肾叶山蓼、川贝母和金露梅等植物的地下部分为食，幼虫在土中逐步成长至蛹化的整个过程大致需经3年的“地下生活”。如果在这个过程中某年某一或某些幼虫不孛被虫草真菌感染，那么次年夏天就变成了冬虫夏草，故冬虫夏草在规格上有大小之分，最大的虫草整个生长过程约需4年之久。

蝙蝠蛾的高龄幼虫一般在6月中下旬被虫草真菌感染，一旦被感染。幼虫立即惊恐不安，随后很快行动迟缓，有的钻出地面到处乱爬，经过一番挣扎后爬向靠植物的根部距地表2~3cm深的土层中，头朝上尾朝下死去。

此时的虫体内已充满菌丝，随后虫体表面的菌丝膜与周围的土壤颗粒黏结成“虫壳”，完成了虫草真菌的无性世代。当年入秋后虫草真菌即开始有性世代，即从被感染而死亡的虫体头部长出高约1cm 的幼小子座，此子座不露出土面，在冻土中越冬。

翌年5月或6月土层解冻后，遇温湿度适宜时，子座以每天3~4mm的速度上长，钻出地面。形似小草。

钻出地面的子座初为淡绿色，后变为紫红色，通常长至3~8cm后不再继续生长。通常一个虫体上只长一个子座，很少长多个者。

出土子座停止生长后，上端稍膨大成能孕部分，其顶部还有尖帽状的不孕顶端。能孕部分表层嵌生无数半埋在组织中的子囊壳，以致能孕部分表面呈颗粒状粗糙。

在显微镜下可以观察到子囊壳呈梨形，壳内有多数子囊，子囊内又有数个长条形的子囊孢子。孢子成熟后破囊从壳口逸出，乘风飞散，随水飘流，遇虫体而再感染，以致冬虫夏草在小环境中的出现常呈带状的集居群。

冬虫夏草的菌物复合体中的菌不是一种而是复杂的真菌系。其差异常常取决于地域环境条件和寄主昆虫的种群特性，在自然界不同地区、不同土壤、气候、植被条件下的不同生物种群（寄生和菌系），常常发生特异的寄生、互生或共生关系，形成不同的生态系统。

2 虫草的化学成分冬虫夏草内的化学成分复杂，其水分10.84%，粗蛋白25.32%，粗纤维18.55%，碳水化合物28.9%，灰分4.1%，脂肪8.4%。包括饱和脂肪酸13.0%（硬脂酸）、不饱和脂肪酸82.8%（油酸占31.29%、B-亚油酸占68.31%）。

从虫草中还分离出D-甘露醇、尿嘧啶、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、蕈糖、麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物和胆甾醇软脂酸酯，以及具有抑菌、抗病毒、抗癌作用的虫草菌素（3，-去氧腺苷）。 3 药理作用 3.1 增强机体免疫调节功能虫草具有促进T和B淋巴细胞增殖作用，明显抑制小鼠脾细胞对刀豆蛋白A和细菌脂多糖的反应；减少小鼠特异抗体分泌细胞数；降低同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应及混合淋巴细胞反应。

来源于虫草的新型免疫抑制剂FTR720，能直接作用于淋巴细胞，其表现免疫抑制效果，可抑制器官移植等的排斥反应； 3.2 抗肿瘤作用现已知肿瘤细胞的生长繁殖需要大量的腺苷，而虫草素以其结构与腺苷相似的特征，通过识别错误，代替腺苷参与肿瘤细胞的生长繁殖，从而抑制肿瘤细胞的生长。冬虫。

2.如何进行冬虫夏草菌种分离与纯化

具体如下：（1）菌种分离培养基配方① 多性蛋白胨10克，葡萄糖30克，酵母胁1克，硫酸镁0。

5 克，磷酸二氢钾1克，琼脂20克，生长素5毫升，加水至1000毫升。② 水解乳蛋白10克，葡萄糖50克，酵母膏1克，硫酸镁0。

5 克，磷酸二氢钾1克，2%卵黄1克，琼脂20克，生长素5毫升，加水至1000毫升。 ③ 土壤浸出液100毫升，琼脂15克，加水至1000毫升。

土壤浸出液制作方法为：取土壤100克加水1000毫升，在121°C下高压灭菌30分钟，浸液加滑石粉后过滤，PH调至中性。④ PDA培养基。

⑤ 查氏培养基。（2）分离选择生长正常、健壮、无病虫害的虫草子实体。

必须严格选择分离用的虫草材料，才能保证培养出菌种。虫草表面消毒，一般常用表面消毒剂是0。

1%〜0。2%升汞溶液，先用药棉浸蘸升汞液迅速涂擦虫草表面，一般擦3〜5次，再用无菌水冲洗数次，也可采用75%酒精进行表面消毒，用药棉蘸酒精迅速涂拭虫草组织表面，一般涂洗2〜3次，然后用无菌水反复冲洗洗净表面残留酒精。

用灭菌纱布吸去水分，在无菌条件下，用已灭菌的刀切去外层，避用虫体内的肠道，切取大约0。1〜0。

4厘米大小的组织块放在培养基的表面，置于15〜24°C培养箱中培养，定期观察，7 天后从小块组织片上长出白色菌丝，即得到菌种。经纯化与鉴定确证为虫草纯菌种后，便可以将菌种保存起来，供作栽培或发酵用菌种。

另外，可以采用子囊孢子分离法获得菌种。

3.冬虫夏草产业链

冬虫夏草与蝠蛾昆虫人工培育和产业化现状（一）有性型冬虫夏草人工培育现状冬虫夏草人工培育在近20年来全国先后有60多个科研单位和数千人进行了大量的研究、实验和探索；云南、四川等地已在高海拔地区取得了小面积培育有性型成功的经验，但由于周期长，高海拔地区无推广对象、投资大、效益不如自然采集的高等多种因素，一直未能大面积推广。

在云南、四川、浙江、甘肃、青海、北京、福建、广东、贵州、广西等省（市、区）中低海拔地区，开展人工培育有性型冬虫夏草研究也有多年，虽然在某一些环节上已有多家取得了十分可喜的成绩或成果，如云南和四川等省已在昆明、成都和重庆的室内人工批量、重复繁殖成功蝠蛾昆虫；浙江等地在室内零星繁殖成功蝠蛾昆虫；但由于没有解决虫与菌接种和批量、重复长出子座体的难关，不能称为培育成功。离小面积、小批量、多次重复在低海拔人工培育出有性型冬虫夏草的目标都还十分遥远；虽然数家已声称在中、低海拔批量培育成功有性型冬虫夏草，事实上科学的可信度极低。

因为：（1）目前还无一家能长期又稳定地分离培养到正宗的冬虫夏草真菌（即反复在培养基上批量长出子座）。青诲、云南、四川、北京等地在培养基上都培养出过子座，但其子囊孢子稀少或无子囊孢子，而且生长都不稳定，不能说明已掌握了有性型人工在中低海拔的培育技术。

（2）冬虫夏草菌无性型人工培养技术比较容易掌握，在室内接种到蝠蛾幼虫上也能感染成为僵虫期，但确罕见有完成有性型，长出子座体和子囊孢子。（3）目前子座的形成除了海拔、气候、土壤、气压等多种环境因素外，其菌之间是否多菌复合感染？如果是复合感染，又是哪一些菌在起关键作用？在什么时期与冬虫夏草菌起作用？等等问题尚不清楚。

因此，要在中低海拔地区人工批量和重复培育出有性型的冬虫夏草，还需做大量的研究和实验工作。就是在高海拔地区进行大面积人工培育冬虫夏草，也还需开展许多技术性的实验工作。

所以有性型冬虫夏草人工培育要达到规模化或产业化生产，研究还十分艰巨，路程还非常遥远。（二）无性型冬虫夏草人工培养现状由于有性型冬虫夏草的人工培育困难太大，近10多年来，大部分开展冬虫夏草人工培育研究的单位和研究人员都纷纷转向无性型的研究与应用上。

由于虫草菌无性型培养技术容易掌握，而且从自然界采集冬虫夏草分离出来的真菌，绝大部分理化性质和药理功能与冬虫夏草的有性成分相似，所以各地都把自我分离出的真菌确定为冬虫夏草菌的无性阶段，并纷纷建厂生产菌粉和开发应用。目前已从自然界的冬虫夏草体中分离出自我认为是中华虫草菌无性型共有9属31种，其中有16种已经在北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、广东、云南、贵州等19个省（市）40多家，进行深层大规模发酵培养和固体培养菌丝体和分生孢子体作为有性型冬虫夏草的代用品，部分厂家已进入大的产业化生产，如至灵胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊、心肝宝、冬虫夏草鸡精、虫草胶囊、冬虫夏草酒、冬虫夏草人参补酒等20多种产品年产值均达千万元至数亿元。

而且，由于用菌丝体和分生袍子人工繁殖周期短、产量高，今后作为冬虫夏草有性型的代用品，开发、应用的潜力还极大。三、冬虫夏草和蝠蛾昆虫人工培育技术（一）冬虫夏草茵的寄主昆虫饲养繁殖技术要进行冬虫夏草的人工培育，首先必须大量人工饲养寄主一一蝠蛾属昆虫。

蝠蛾一生中有98%的时间都在土壤内生活，仅有2。5一13d的成虫期营地面生活。

所以，这类昆虫的人工饲养管理主要是在土壤中开展。 1。

蝠蛾的饲养工具（1）蝠蛾卵的饲养工具。饲养蝠蛾卵可用两种方法，一是用直径15一20cm的玻璃培养皿，垫上2一3层滤纸，皿内放一块吸水棉保持湿度，每皿可饲养200一500粒卵。

此法利于观察，但难掌握湿度。二是用l0cm xX5一8cm的广口瓶或者25cm x 30cm的玻璃饲养缸，内置3一5cm厚的过筛细腐殖土，种上1一2棵珠芽寥植物，把卵放养于土表至lcm深的土层中，每瓶可饲养300一1000粒卵；饲养时只要掌握住植物不枯萎，即可不加湿度。

此法卵的孵化率高，但观察和移植幼虫对比较困难。（2）幼虫的饲养工具有以下4种。

a。玻璃养虫缸：用18一25cmX30一35cm的玻璃缸，也可用标本浸泡缸，放置土壤15一25cm，种上幼虫取食的植物，把刚孵化幼虫移入缸内，每缸可饲养10一30头幼虫。

b。地下养虫箱：箱一般高30一50cm，宽20一25cm，厚3一5cm。

饲养箱骨架用钢筋焊成，上面钢筋做成提手，便于提动；宽的两面用3一5mm玻璃，便于观察虫体活动；底和两个侧面装上16孔目的铜纱网，便于水分渗入。然后装上土壤，种植饲料植物，每箱放养20一50头幼虫；在较坚实的地上挖一个比饲养箱体积稍大和深的槽，把养虫箱放入槽中，观察时将养虫箱提出地面，抹去外表玻璃上的土壤，即可清楚看到幼虫活动情况。

c。大型养虫笼：在半自然的状况下，选择一块排水好、土质疏松的场地，挖长12一l5m、宽2一3m、深4Ocm的深槽，底部和四周垫上尼龙纱网（最好用双层，小虫不易钻出），再把疏松的腐殖土铲进填平，。

4.怎么分离冬虫夏草菌

人工栽培冬虫夏草时，要求条件较高，要获得纯正的冬虫夏草菌种，还必须进行人工分离、纯化、复壮、保存等工作。

一般来说，为获得纯菌种进行冬虫夏草的组织块分离法比较好，最佳的分离材料是每年10月〜11月高原高寒草甸土壤刚开始冻结时期采集的材料。这个时期冬虫夏草菌刚感染蝠蛾幼虫进人僵虫期不长时间，嫩小的子座芽刚长出虫头部0。

2 ~0。5厘米，虫体内其他杂菌较少，最易进行分离。

如果是第二年5 ~6月份采集的材料，僵虫体和子座上都有多种杂菌共生或腐生，这时难以获得纯菌种。采用子囊孢子进行分离培养时，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子部分成熟期采集，然后进行分离培养。

进行分离操作时，主要分为菌核分离、子座芽分离、子囊孢子分离三个步骤。菌核分离操作时，分离前先用水刷洗干净主体表面，再用无菌水清洗2 ~ 3次；用0。

1% ~0。 2%的升汞溶液对分离材料进行3 ~5分钟的表面消毒；再用无菌水清洗。

选取与胸足为界的前段部分，取血腔菌丝切成芝麻粒大小，压人平板培养基中，每皿1~2粒。置于15 ~ 19丈中培养，待菌落长出0。

2 ~0。 5厘米时，挑选少量菌丝反复在平板培养基上分纯2 ~4次，确定无其他杂菌后，才能进行保存和培养。

子座芽分离时，可从僵虫头顶切下洗净的子座芽，置人 0。1%升汞液中消毒2〜3分钟，再用无菌水洗净，切取中间部位组织块压人培养基中。

子囊孢子分离时，用透明纸袋套住子囊孢子成熟的子座，让子囊孢子散射粘贴在纸袋上，然后，把有子囊孢子的纸袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15 ~19度中培养，当孢子萌发时，用微吸管吸单个孢子滴于平板中培养。分离时，也可把整个成熟的冬虫夏草带回室内，用棉纸把僵虫和连虫体的子座包住，仅留出有孕部分，在无菌室中，横放，下置一片载玻片，随时保持主体湿度，当看到子囊孢子散射到玻片时，用微吸管吸到平皿的培养基中培养。

5.冬虫夏草

冬虫夏草，又称为夏草冬虫，简称虫草。

全世界目前已报道发现由虫草属真菌Cordyceps寄生于昆虫、蜘蛛和其他生物长出子实体的虫草种类达400多种；我国已记录68种。在国内外一些人和学者的概念中，把凡是由虫草属真菌寄生并能产生子实体的菌物结合体都通称为冬虫夏草。

然而，中国传统的中医药学和我国绝大部分学者和人们及本文所指的冬虫夏草，是特指仅分布于我国青藏高原及边缘地区高寒草甸中的中华虫草菌Cordyceps sienesis (Berkeley) Saccardo (1878)寄生于昆虫纲、鳞翅目、蝙蝠蛾科、蝠蛾属Hepialus幼虫感病后形成的虫、菌结合体；；而其他类群仅称为虫草，不是正宗的冬虫夏草。虫草是含有多种营养物质的常用中药，主要成分有：虫草酸、粗蛋白和谷氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、精氨酸、丙氨酸和饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸及维生素B12等物质。

虫草的功能为增强人体免疫力，补虚损，益精气。补肺益肾，治肾虚咳喘、咯血、腰膝酸痛、阳痿早泄、遗精、病后久虚、自汗、盗汗等虚证。

虫草除了药用外，也可用于煮汤，以提高免疫力、抗疲劳。虫草为麦角菌科植物，干燥的虫草体与菌座相连而成，全长9~12厘米，虫体如三眠老蚕，长3~6厘米，粗约0.4~0.7厘米。

表面棕黄色，粗糙，背部有许多横皱纹，腹部有8对足，中间4对足较明显，其特征如蚕体，质轻而脆，易折断，断面类白色，周边显深黄色，断面心内充实。虫体头部生出菌座呈棒状，弯曲，上部略膨大，表面灰褐色或黑褐色，长达4~8厘米，气微臭，以虫体色泽黄亮，丰满肥大，断面黄白色，菌座短小者为佳。

真虫草用开水浸泡，虫体变膨大而软，菌座色加重成为黑褐色，虫体和菌座紧相连，不脱落。浸液微有臭味。

由于虫草价格昂贵，用药量大，供不应求，一些不法商贩，想尽一切办法制造假虫草。有的用地蚕、地笋等制造假虫草，以假乱真，使一些鉴别能力较强的中药专家不用理化鉴别手段也难以鉴别。

但是，只要有较高的鉴别能力，仔细观察，还是可以识别的。假虫草色泽比真虫草略黄而色泽不光亮，细看黄色带点状，味臭，断面类白色有暗点并有髓腔。

其他外观完全和真虫草相同。假虫草用开水浸泡10分钟后，会慢慢显出原形，黄色开胎脱落，假菌座也开始脱落，与虫体分开。

虫体有的变成植物根茎、地蚕，有的变成僵蚕体，菌座慢慢变成类白色的黄花菜，黑褐色的颜色完全退掉，浸泡的开水渐渐变成浅黑色，微有黏性。希望广大使用者注意识别，严防假冬虫草危害人民的健康。

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